酪氨酸脱羧酶丨Worthington粪链球菌酪氨酸脱羧酶的特征

酪氨酸脱羧酶催化酪氨酸中羧基的脱除，生成酪胺和二氧化碳。

5'-磷酸吡哆醛是一种必需的辅酶。通过利用在维生素 B6 缺乏培养基上生长的细胞制备的脱辅酶 (TYDAPO)，可以测定磷酸吡哆醛。参见 Umbreit等人。(1945) 和 Gunsalus 和史密斯 (1957)。放射性标记的酪氨酸的脱羧作用允许测定更少量的磷酸吡哆醛（Maruyama 和 Coursin 1968；Sundaresan 和 Coursin 1970）。丙酮干燥的细胞被用作相对简单的脱辅基酶提取和纯化的来源。

全酶可用于以测压法或比色法测定酪氨酸、苯丙氨酸和二羟基苯丙氨酸。Tashian (1957) 报道了基于此原理测定尿液中酪氨酸的方法。血浆苯丙氨酸也可以使用这种酶来测定。最初的方法由 Udenfriend 和 Cooper (1953) 描述，修改已由 Hsia (1959) 和 Knox 和 Messinger (1958) 发表。Poisner (1960) 使用 Hsia 的方法测定了精神分裂症患者的血清苯丙氨酸水平，结果显着高于正常水平。

Boeker 和 Snell (1972) 对氨基酸脱羧酶进行了综述。另见 Snell 和 DiMari (1970)。

艾美捷Worthington粪链球菌酪氨酸脱羧酶的特征：

最佳 pH 值：5.5（Boeker 和 Snell 1972）。

特异性：L-苯丙氨酸和二羟基苯丙氨酸的作用速度比 L-酪氨酸慢得多。

抑制剂：重金属（Ag +、Cu 2+、Fe 2+、Fe 3+、Pb 2+）KCN、NHOH、N 2 H 4和SO 4=。

稳定剂：甘油 10-25%、巯基乙醇 (5 mM) 和 L-酪氨酸 (0.5 mM) (Chabner and Livingston 1970; Sundaresan and Coursin 1970)。

 

 

艾美捷Worthington酪氨酸脱羧酶测定方法：

此处使用的测定法基于 Gunsalus 和 Smith 的测定法（酶学方法，III，（Colowick, S. 和 Kaplan, N. 编辑），Academic Press, NY, 963, 1957）。在指定条件下，一个单位在 37°C 和 pH 5.5 条件下每分钟从 L-酪氨酸 产生 1 微摩尔 CO 2 。

试剂：

1.0.8 M 醋酸钠，pH 5.5

2.0.074 M 醋酸钠，pH 5.5

3.0.0065 M L-酪氨酸在试剂级水中。边搅拌边加热至 80°C 溶解。平衡至 37°C。（如果溶液冷却，可能会形成晶体）。

酶：

将酶溶解在 0.074 M 乙酸钠，pH 5.5 中，浓度为 2 mg/ml。在取出等分试样前立即混合均匀。

程序：

将以下移液器移入 Warburg 烧瓶的主孔中：

0.8 M 醋酸钠，pH 5.5 0.2 毫升

0.0065 M L-酪氨酸，37°C 2.3 毫升

移取 0.5 ml 酶悬浮液到烧瓶的侧臂中。包括一个不含酶的烧瓶作为空白，一个不含酶的烧瓶作为空白，一个装有 3.0 ml 试剂级水的烧瓶作为热气压计。将烧瓶连接到压力计。平衡 10 分钟后，关闭压力计，倾倒并混合底物，然后更换浴中的烧瓶。

确定以大约 5 分钟间隔释放 30 分钟的 CO 2微摩尔数。绘制释放的微摩尔 CO 2与反应时间的关系，并从曲线的线性部分确定每分钟释放的微摩尔。

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。