Epigentek染色质可及性检测试剂盒原则与程序

艾美捷Epigentek EpiQuik 染色质可及性检测试剂盒是一套完整的优化试剂，旨在通过实时 PCR 对各种生物样品的核小体/转录因子定位进行染色质可及性的基因特异性分析。它是快速检测开放和封闭染色质的一种经济有效且有用的工具。

艾美捷Epigentek  EpiQuik 染色质可及性检测试剂盒特点：

1、J其快速和方便的方案，使整个过程（从细胞组织样本到用于 PCR 的即用 DNA）在短短 1 小时 30 分钟内完成。

2、能够用于培养的细胞以及新鲜和冷冻的组织。

3、快速过程可最大限度地减少核损伤和分离染色质成分的损失，保留染色质结构。

4、试剂盒中包含人用内部对照引物作为参考，用于分析样本 DNA 中特定基因靶标的染色质可及性程度，以及验证是否实现了适当的酶消化。

5、可以选择单反应测定或高通量多反应测定，使测定灵活。

背景资料：

染色质中调控元件的可及性对于基因调控的许多方面都至关重要。位于调节元件上的核小体抑制转录因子接近 DNA。为了阐明染色质和转录因子之间相互作用的作用，通过绘制核小体沿基因组的定位来确定染色质的可及性至关重要。一般来说，染色质越浓缩，转录因子和其他 DNA 结合蛋白就越难接近 DNA 并执行它们的任务。DNA 越容易接近，周围的基因就越有可能被主动转录。核小体的存在（或不存在）直接或间接影响多种其他细胞和代谢过程，例如重组、复制、着丝粒形成和 DNA 修复。

艾美捷Epigentek EpiQuik 染色质可及性检测试剂盒原则与程序：

EpiQuik 染色质可及性检测试剂盒包含通过实时 PCR 对细胞/组织样本的染色质可及性进行基因特异性分析所需的所有必要试剂。该试剂盒包括用于确定染色质消化是否成功的内部对照引物。在该测定中，染色质从细胞/组织中分离出来，并用核酸酶混合物进行处理。然后使用实时 PCR 分离和扩增 DNA，以对染色质可及性进行区域特异性分析。染色质状态可以根据 DNA 对核酸酶的可及性来识别。外部蛋白质（包括外源性核酸酶）无法接近异染色质中的 DNA，使其受到核小体或 DNA/蛋白质复合物的保护，并可用于随后的 PCR，消化和未消化样品之间的 Ct 变化微不足道。相比之下，常染色质中的 DNA（核小体消耗）可被外源核酸酶访问，使其易受核酸酶消化，并且由于消化和未消化样品之间的大 Ct 偏移而无法用于 PCR。

起始材料和输入量：

起始材料可以包括各种哺乳动物组织或细胞样品，例如来自烧瓶或微孔板培养细胞的细胞、新鲜和冷冻组织等。每个反应的细胞/组织量可以来自 1 x 10 5 个 细胞或2 mg 组织至 2 x 10 6 个 细胞或 40 mg 组织。为获得最佳反应，输入染色质量应约为 0.5 x 10 6 个 细胞或 10 mg 组织。

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