Worthington酶促细胞收获＆细胞粘附和收获

艾美捷Worthington方法和材料：酶促细胞收获

大多数在体外生长的非恶性细胞四处移动并分裂，直到它们形成一个细胞厚的单层，完全覆盖培养容器的表面。当达到汇合时，运动和增殖通常会停止。为研究、加工或继代培养而收获细胞需要解离和分离单层。用胰蛋白酶对细胞层进行有限处理是最常用的方法。

以前认为胰蛋白酶制剂只是水解一种蛋白质粘合物质，这种物质负责使细胞牢固地附着在它们的基质上，从而使细胞从培养容器中分离出来。现在认为胰蛋白酶在细胞收获中的作用机制更为复杂。

 

艾美捷Worthington方法和材料：细胞粘附和收获

在间期，培养中的成纤维细胞样细胞以特征性的纺锤形结构分布在基质上。关于细胞粘附的实际区域是分布在细胞的大部分下表面还是位于细胞边缘附近的相对狭窄的斑块中，主要是在起皱活动附近，存在意见分歧。在任何一种情况下，这些粘附区域似乎都是由附着点簇组成，每个附着点的直径约为 1 µm。各个附着点显然是与基质结合的细胞骨架结构的远端部分。

在将培养的细胞置于低温、螯合剂或胰蛋白酶溶液后的几分钟内，它们会通过四舍五入和起泡而急剧改变形状。电子显微照片显示许多直径为 0.25 - 0.5 µm 的长回缩纤维从圆形细胞体表面延伸到先前位于扁平细胞下表面的扩大的末端灯泡附着点。

细胞保持附着在基质上，直到纤维断裂，或者通过敲击或摇动培养容器进行机械断裂，或者通过螯合剂和/或胰蛋白酶的持续作用进行化学反应。（单独的低温足以围成圆形，但不足以分离。这些条件也大大减少了胰蛋白酶进入细胞。）细胞从培养容器表面分离后不久，传代培养到含有无胰蛋白酶培养基的新容器中，细胞质流入断裂的回缩纤维并重新填充它们。一个小时内，圆形细胞开始呈现出它们特有的形状。

注：Worthington 的组织解离酶可互换用于所引用的大多数制剂。

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。