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Worthington脱氧核糖核酸酶I特异性和相关研究
2022-06-24 03:50:00 【Sylvia_sc】
脱氧核糖核酸酶Ⅰ是一种核酸内切酶,zui早由M.Kunitz结晶的所得。离子的存在对切断方式有着明显的影响。在不断的研究发展过程中,也被作为一种研究材料。
脱氧核糖核酸酶Ⅰ是最有代表性的核酸内切酶。最早是由M.Kunitz从胰脏中分离出结晶的,也称为胰脱氧核糖核酸酶或DNaseⅠ, EC3.1.21.1。分子量约3.1万,等电点pH4.7,最适PH 7附近,需要Mg2 和Mn2 。分离单链和双链DNA,产生具有 5′-磷酸末端的分解物。在一般条件下其分解产物含有1到8—12个寡聚核苷酸,平均大小等于四个核苷酸。反应初期似乎是先分解dpPupPy键,但因二价离子的存在对切断的方式有显著影响。因此酶容易得到结晶,所以于核酸 的研究上广泛应用;又由于对整个结构已经明确,因而也是酶化学研究的材料。
艾美捷Worthington 脱氧核糖核酸酶I特异性:
bpDNase I 不是碱基或序列特异性的;但是,它不会随机切割。它显示优先在嘧啶的 5' 侧进行裂解,并且在替代共聚物中尤其明显(Bernardi 等人 1975 和 Lomonossoff 等人 1981)。已经表明,扭曲角的变化被 DNase I 识别(Dickerson 和 Drew 1981)。DNase I 的特异性还取决于存在的二价阳离子。在存在 Ca2+ 和 Mg2+ 的情况下,它会导致单链断裂,而在存在 Mn2+ 的情况下会导致双链断裂(Junowicz 和 Spencer 1973,以及 Campbell 和 Jackson 1980)。
艾美捷Worthington脱氧核糖核酸酶I分子特征:
与人类、小鼠和大鼠类似,牛胰腺 DNase I 基因由 9 个外显子组成,只有最后 8 个外显子编码该蛋白质(De María 和 Arruti 2003)。新生蛋白通过由外显子二编码的 22 个氨基酸信号序列引导至分泌途径细胞器。主要活性位点残基 H166 由外显子 6 编码(De María 和 Arruti 2003 和 Kraehenbuhl 等人 1977)。尽管牛和其他哺乳动物的外显子长度几乎相同,但内含子的长度差异很大。TATA 盒序列位于外显子 I 上游 35 bp(De María 和 Arruti 2003)。已经提出影响编码序列的多重剪接事件可能是下调 DNase I 表达的机制(Liu 等人 1997)。
脱氧核糖核酸酶I相关研究:
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