Worthington细胞分离技术丨基本原代细胞分离方法和材料

艾美捷Worthington方法和材料：基本原代细胞分离

1.对于非灌注，用无菌剪刀或手术刀将分离的组织切碎或切成 2-4 毫米的块。

2.将组织块加入适当的缓冲液或冰上的平衡盐溶液中，洗涤 2-3 次。

3.加入适量的酶并在最佳温度（通常为 37°C）下孵育适当的时间，间歇混合。

4.通过移液（研磨）轻轻分散细胞。

5.通过细网过滤细胞悬浮液。

6.让细胞沉淀并倒出含有酶的多余液体。洗涤并重复2-3次。

7.在适当的培养基或缓冲液中重悬细胞。

8.定量细胞产量和活力。

9.如果需要，用于培养的种子细胞。

 

灌注程序需要特殊的设备和技术来循环缓冲液、培养基和酶。请参阅参考文本以获取更多信息和指导。

 

艾美捷Worthington方法和材料：研磨：（通过温和的泵送作用分散细胞）

这可能是一个至关重要的过程。它用于在解离混合物中孵育后分解组织碎片。如果做得太猛烈，细胞会被破坏，降低活力；太弱，组织碎片将保持完整，从而降低产量。使用 10 ml 移液器轻轻研磨，以每秒约 3.0 ml 的速度填充和排空桶。您可以通过反复试验确定最适合您的组织的速率。避免使细胞悬液起泡。

注：Worthington 的组织解离酶可互换用于所引用的大多数制剂。

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。