Worthington溶菌酶技术说明及文献参考

溶菌酶优先水解 N-乙酰胞壁酸和 N-乙酰氨基葡萄糖之间的 β-1,4 糖苷键，这些键存在于某些微生物的粘肽细胞壁结构中，例如溶血微球菌（产品代码：ML）。对几丁质低聚物表现出稍微有限的活性。它的分子量为 14,388 道尔顿。最佳 pH 值为 9.2。溶菌酶受表面活性剂如十二烷基硫酸盐、酒精和脂肪酸的抑制。咪唑和吲哚衍生物形成抑制性带电转移复合物。

稳定性/储存: 在 2-8°C 下稳定 3-5 年。pH 值 4-5 的溶液在冷藏下可稳定数周，在环境温度下可稳定数天。储存在 2-8°C。

艾美捷 Worthington溶菌酶技术说明：

由于测定差异，Worthington 测定的 8,000u/mg 相当于其他方声称的 50,000u/mg。

单位定义：一个单位等于在 pH 7.0 和 25°C 下，在 450 nm 下，浊度每分钟降低 0.001，使用 0.3mg/ml溶血微球菌细胞悬液（WBC 产品代码 ML）作为底物。

艾美捷 Worthington溶菌酶测定：

Method : Micrococcus lysodeikticus的裂解率按照 Shugar (1952) 的建议进行测定。一个单位等于在指定条件下，在 pH 7.0 和 25°C 下，在 450 nm 处浊度每分钟降低 0.001。据报道，在这些条件下，纯溶菌酶制剂的活性范围很广。8,000 u/mg dw 的 Worthington 比活度相当于其他供应商声称的 50,000 u/mg dw。

试剂：

0.1 M 磷酸钾，pH 7.0

Micrococcus lysodeikticus细胞：通过将 9 mg 干燥的Micrococcus lysodeikticus（Worthington 代码：ML）细胞悬浮在 25 ml 0.1 M 磷酸钾缓冲液（pH 7.0）中进行制备。用相同的缓冲液稀释至终体积为 30 ml。

酶：

将酶以 1 mg/ml 的浓度溶解在冷试剂级水中。保持凉爽直到化验。在测定前立即用试剂级水稀释至 150-500 单位/ml 的浓度。（速率应在 0.015-0.040 ΔA 450 /分钟之间）。

程序：

将分光光度计调整到 450 nm 和 25°C。

吸取 2.9 ml溶血微球菌细胞悬液到比色皿中，孵育 4-5 分钟以达到温度平衡并确定空白率（如果有）。向比色皿中加入 0.1 ml 适当稀释的酶，并记录曲线初始线性部分的A 450每分钟变化。

计算：

艾美捷 Worthington溶菌酶相关参考文献：

1.溶菌酶，E。Osserman、R. Canfield 和 S. Beychak，纽约学术出版社，1974 年

2.Acharya, A. 和 Taniuchi, H.： 溶菌酶二硫化物中间体的结构和稳定性对复性机制的影响 ， Mol Cell Biochem 44 , 129, 1982

3.Acharya, A. 和 Taniuchi, H.： 溶液条件对硫醇依赖性复性过程中连续非天然二硫键的鸡蛋溶菌酶中间体形成的 影响 ， J Biol Chem 255、1905、1980