Worthington用于细胞收获的胰蛋白酶＆细胞释放程序

艾美捷Worthington用于细胞收获的胰蛋白酶：

1916 年，Rous 和 Jones 使用“Merck、Brubler 和 Kahlbaum 的胰蛋白酶粉末”消化活细胞在其中生长的血浆凝块，以获得用于传代培养的细胞悬液。1934 年，Vogelaar 和 Erlichman 是下一个研究人员，他们利用粗胰蛋白酶制剂中的消化酶来液化人成纤维细胞在传代培养之前生长的凝固血浆。Scherer、Syverton 和 Gey 于 1953 年引入了类似于今天使用的胰蛋白酶技术，以收获当时新培养的 HeLa 细胞株，用于继代培养和生化分析。这些工作人员测试了重结晶胰蛋白酶和 NF 1:250 胰蛋白酶用于细胞收获，发现纯化的胰蛋白酶更有效，对细胞的毒性更小。尽管如此，NF 1：

相对粗制的胰腺制剂如 NF 1:250 胰蛋白酶今天仍然用于细胞收获，尽管它们表现出相当大的批次间变异性并含有外来物质和其他酶活性。粗胰蛋白酶中的杂质会对细胞造成不必要的损害并降低克隆效率。使用更高纯度的结晶胰蛋白酶可以消除许多这些困难。

NF 1:250 材料中存在的任何污染物似乎都不是细胞收获活性所必需的，因为纯化的胰蛋白酶对单层解离非常有效，而且粗制 NF 1:250 胰蛋白酶加大豆胰蛋白酶抑制剂无效。

McKeehan 和 Ham 报告说，在低温（即 4°C）下用结晶胰蛋白酶收获时，在低血清培养基中单细胞的活力和增殖潜力显着提高。

 

 

Worthington细胞释放程序：

为了将单层培养中的细胞从一个培养容器转移或传递到另一个培养容器，有必要将细胞从单层释放到悬浮液中，以便可以通过移液和稀释轻松处理它们。

从单层释放细胞几乎总是使用纯化的胰蛋白酶通过称为胰蛋白酶化的过程来完成。通常的胰蛋白酶消化过程在下面的插图中进行了详细说明。

艾美捷Worthington胰蛋白酶消化程序：

1.从细胞中去除培养基。

2.添加无菌胰蛋白酶溶液（在 BSS 平衡盐溶液中，通常不含钙的 Hanks。

3.让胰蛋白酶溶液在室温或 37°C（或 4°C 更长时间）下作用于单层几分钟。

4.轻轻去除胰蛋白酶溶液，以免干扰细胞。

5.添加 BSS 或培养基（通常含有血清或胰蛋白酶抑制剂以灭活残留的胰蛋白酶）并搅拌容器以破坏单层细胞并悬浮细胞。

一些研究人员发现，使用结晶胰蛋白酶的程序可以提高细胞释放后的活力。活力通常通过测量克隆效率来确定，即单个细胞附着在培养容器壁上并分裂产生染色后肉眼可见的细胞集落的能力。

注：Worthington 的组织解离酶可互换用于所引用的大多数制剂。

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。