Worthington木瓜蛋白酶解离系统解决方案

艾美捷Worthington Papain Dissociation System 是一套试剂，旨在用于 Huettner 和 Baughman 的神经细胞分离方法 ( J. Neurosci., 6 , 3044, 1986)。这些材料是为了方便和简单而设计的，对偶尔使用的用户以及更有经验和经常使用的用户都很有用。每个批次都经过大鼠脊髓神经细胞分离性能测试，该试剂盒为每次解离提供新鲜制备的酶溶液。

稳定性/储存： 试剂在环境温度下在正常运输程序中预期的一段时间内是稳定的，但包装在到达时应冷藏。使用前，内容物可在 2-8°C 下保存 4-6 个月。储存在 2-8°C。

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶解离系统包装内容：

该包装包含足够的材料，可以分离五份最多 0.3-0.4 cm 3的单独组织等分试样。对于较大的组织样本，在每个步骤中按比例准备较大体积的试剂，并按照协议中所述的相同比例将它们组合起来。

  

 

• 小瓶1： 含有钙、镁、碳酸氢盐和酚红的无菌厄尔平衡盐溶液(EBSS)，每包一瓶，100 毫升。该小瓶的等分试样用于重构其他小瓶并制备稀释的抑制剂溶液。在使用之间冷藏并在每次使用前用无菌 O 2 :CO 2平衡。

• 小瓶2：含有L-半胱氨酸和EDTA 的木瓜蛋白酶，每包5 x 100 单位一次性小瓶。该材料经 0.22 微米膜过滤并在高压灭菌的小瓶中冻干。用 5ml EBSS（小瓶 1）重构的小瓶在 1mM L-半胱氨酸和 0.5mM EDTA 中产生每毫升 20 单位木瓜蛋白酶的溶液。需要在 37°C 下短暂孵育以确保完全溶解和活性。

• 小瓶3：脱氧核糖核酸酶I (DNase)，每包5 x 2000 单位一次性小瓶。

该材料经过 0.22 微米膜过滤并在高压灭菌小瓶中冻干。用 0.5ml EBSS（小瓶 1）复溶的小瓶产生每毫升 2000 单位脱氧核糖核酸酶的溶液。避免剧烈混合。

• 小瓶4：含有牛血清白蛋白的卵类粘蛋白蛋白酶抑制剂，每包一瓶，重构后32ml。

该材料经过 0.22 微米膜过滤并在高压灭菌小瓶中冻干。用 32ml EBSS（小瓶 1）复溶的小瓶产生的溶液的有效浓度为每毫升 10mg 的卵类粘蛋白抑制剂和 10mg 白蛋白。该小瓶的等分试样用于每次解离。在使用之间冷藏并在每次使用前用无菌 O 2 :CO 2平衡。在 2-8°C 储存时，重构后稳定。

还包括一张将颜色与 pH 值关联起来的卡片，用作 O 2 :CO 2平衡的指南。

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶解离系统相关研究：

胶原酶 (CLS1-4/CLSPA)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)

蛋白酶 K (PROK)

胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS /TRTPCK)

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)

细胞分离优化系统 (CIT)

肝细胞分离系统 (HIS)

新生儿心肌细胞分离系统 (NCIS)

相关参考文献：

1.Bader, C.、MacLeish, P. 和 Schwartz, E.： 对从 Tiger Salamander Retina 分离的孤立棒状感光器的光的反应 ， Proc Natl Acad Sci USA 75 , 3507, 1978

2.巴绍尔，马克 M： 卷。五十八 (I) ,, , 124, 1979

3.Dreyfus, Cheryl F. 和 Black, Ira B.: Methods Neurosci 2 , 10, 1990

4.Finkbeiner, S. 和 Stevens, CF： 定量测量在评估谷氨酸神经毒性中的应用 ， Proc Natl Acad Sci USA 85 , 4071, 1988