基因组 DNA 分离丨Worthington核糖核酸酶A

胰腺核糖核酸酶 (RNase) 是一种核糖核酸内切酶。它催化核苷酸的 5'-核糖和与相邻嘧啶核苷酸的 3'-核糖相连的磷酸基团之间的磷酸二酯键的断裂。这种切割形成 2',3'-环状磷酸盐，然后水解成相应的 3'-核苷磷酸盐。

RNase 在反刍动物胰腺中的含量最高（Barnard 1969）。结晶酶的主要成分是 RNase A；一个次要成分是 RNase B。RNase B 是 RNase A 的糖基化形式（Beintema et al. 1976）。

艾美捷Worthington 核糖核酸酶A特异性：

RNase A 对嘧啶核苷键具有特异性（Volkin 和 Cohn 1953）。据信该反应分两步进行。在步中，3',5'-磷酸二酯键被裂解，同时生成 2',3'-环状磷酸二酯中间体。第二步，环状磷酸二酯水解成3'-单磷酸基团。步对于底物的含氮碱基是非特异性的；然而，第二步对于末端为 2',3'-环状磷酸的嘧啶核苷酸是特异的。RNase B 对环状胞苷酸和酵母 RNA 具有与 RNase A 相同的特异性（Plummer 和 Hirs 1963）。RNase A 显示出对较大底物的偏好（Nogués等， 1995）。

该酶在胞苷残基处的裂解速度是尿苷残基处的两倍（Richards 和 Wyckoff 1971）。已发现 Thr45 通过与嘧啶碱基形成氢键和在空间上排除嘌呤碱基对介导嘧啶特异性最重要（del Cardayré 和 Raines 1994）。Asp83 的侧链对于稳定含尿苷底物裂解过程中的过渡态很重要；该残留物对胞苷裂解的动力学没有影响（del Cardayré 和 Raines 1995）。

  

艾美捷Worthington 核糖核酸酶A的7个应用：

1.DNA分离过程中的RNA去除

2.RNA序列分析

3.RNase 保护试验

4.RNA定量或作图

5.纯化质粒 DNA

6.基因组 DNA 分离

7.分子量标记

艾美捷Worthington核糖核酸酶A参考文献：

1.Admed, A., Schaffer, S., and Wetlaufer, D.: Nonenzymic Reactivation of Reduced Bovine Pancreatic Ribonuclease by Air Oxidation and by Glutathione Oxidoreduction Buffers , J Biol Chem 250, 8477, 1975

2.Ahmad, F.: Free Energy Changes in Denaturation of Ribonuclease A by Mixed Denaturants. Effects of Combinations of Guanidine Hydrochloride and One of the Denaturants Lithium Bromide, Lithium Chloride and Sodium Bromide , J Biol Chem 259, 4183, 1984

 

3.Ahmad, F.: Free Energy Changes in Ribonuclease A Denaturation. Effect of Urea, Guanidine Hydrocholoride and Lithium Salt, J Biol Chem 258, 11143, 1983

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。