Abnova 体外转录 mRNA工作流程和加帽方法介绍

体外转录（IVT）mRNA被广泛用于基础研究和应用，为快速和可控地诱导目标蛋白提供了一个有前途的基因表达系统。基于其安全性和高效性，IVT mRNA是一种强大的方法，在再生医学、疫苗接种、细胞工程和蛋白质替代疗法中具有潜在的应用。具有内部表观遗传修饰的IVT RNA合成需要DNA模板、酶、核苷酸和缓冲剂成分。不熟悉IVT mRNA技术或寻找快速而有效的服务？

艾美捷 Abnova有较为丰富的IVT mRNA服务，包括DNA模板生产、mRNA生产和mRNA质量控制。

艾美捷Abnova IVT mRNA工作流程：

从几百个碱基到几千个碱基的定制mRNA

优化的mRNA合成和纯化程序

无细胞生产，无有毒化学品

合格的RNA以满足客户需求

可用于大多数的下游应用

艾美捷 Abnova IVT合成mRNA的服务细节：

1、DNA模板的生产

扩增感兴趣的基因*并将其克隆到表达载体上

质粒DNA的制备和纯化

线性化的DNA制备

2、mRNA生产

线性化的DNA制备

线性化DNA的体外转录成RNA

RNA加帽

加帽的RNA纯化和定量**

3、mRNA质量控制

完整性和纯净度：RNA的琼脂糖凝胶电泳

蛋白质的表达: RNA转染到细胞，细胞裂解液进行Western blot分析。

 

加冒方法：

共同转录修饰

序列 RNA 序列 加帽顺序 帽类似物

Cap 0 GAUG 3´-O-Me-m7G(5')ppp(5')GAUG Anti-Reverse

GTP competition

Cap 1 AUG m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pUG Without Anti-Reverse

Without GTP competition

Cap 1 AGG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeG)pGG Anti-Reverse

Without GTP competition

Cap 1 GGG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA)pGG Anti-Reverse

GTP competition

 

核苷的修饰：

Pseudouridine (Ψ)

5-methylcytidine (m5C)

N1-methylpseudouridine (N1mΨ)